Մաքուր Saposhnikovia divaricata յուղ մոմի և օճառի համար մեծածախ դիֆուզեր պատրաստող եթերայուղ, նոր եղեգի այրիչ դիֆուզորների համար

կարճ նկարագրություն.

 

2.1. SDE-ի պատրաստում

SD-ի կոճղարմատները ձեռք են բերվել որպես չոր խոտաբույս ​​Hanherb Co.-ից (Գուրի, Կորեա): Բուսական նյութերը հաստատվել են տաքսոնոմիկ կերպով Կորեայի Արևելյան բժշկության ինստիտուտի (KIOM) բժիշկ Գո-Յա Չոյի կողմից: Վաուչերի նմուշ (թիվ 2014 SDE-6) պահվել է ստանդարտ բուսական ռեսուրսների կորեական հերբարիումում: SD-ի չորացած կոճղարմատները (320 գ) արդյունահանվել են երկու անգամ 70% էթանոլով (2 ժամ ռեֆլյուքսով) և այնուհետև մզվածքը խտացվել է նվազեցված ճնշման տակ: Թուրմը զտվել է, լիոֆիլացվել և պահել 4°C ջերմաստիճանում: Հում սկզբնական նյութերից չորացրած քաղվածքի եկամտաբերությունը կազմել է 48,13% (ք/վ):

 

2.2. Քանակական բարձր արդյունավետության հեղուկ քրոմատոգրաֆիայի (HPLC) վերլուծություն

Քրոմատոգրաֆիկ անալիզը կատարվել է HPLC համակարգով (Waters Co., Milford, MA, ԱՄՆ) և ֆոտոդիոդային զանգվածի դետեկտորով: SDE-ի HPLC վերլուծության համար պրիմ-O-Գլյուկոզիլցիմիֆուգինի ստանդարտը գնվել է Ավանդական բժշկության արդյունաբերության Կորեայի խթանման ինստիտուտից (Գյոնսան, Կորեա) ևվրկ-Օ-գլյուկոզիլհամուդոլ և 4'-O-β-D-գլյուկոզիլ-5-O-methylvisamminol-ը մեկուսացվել է մեր լաբորատորիայում և նույնացվել սպեկտրային անալիզների միջոցով, հիմնականում NMR-ի և MS-ի միջոցով:

SDE նմուշները (0.1 մգ) լուծարվել են 70% էթանոլում (10 մլ): Քրոմատոգրաֆիկ տարանջատումը կատարվել է XSelect HSS T3 C18 սյունակով (4,6 × 250 մմ, 5μմ, Waters Co., Milford, MA, ԱՄՆ): Շարժական փուլը բաղկացած էր ացետոնիտրիլից (A) և 0.1% քացախաթթվից ջրի մեջ (B) 1.0 մլ/րոպե հոսքի արագությամբ: Օգտագործվել է բազմաստիճան գրադիենտ ծրագիր՝ 5% A (0 րոպե), 5–20% A (0–10 րոպե), 20% A (10–23 րոպե) և 20–65% A (23–40 րոպե): ). Հայտնաբերման ալիքի երկարությունը սկանավորվել է 210-400 նմ-ով և գրանցվել 254 նմ-ով: Ներարկման ծավալը կազմել է 10.0μL. Ստանդարտ լուծույթներ երեք քրոմոնների որոշման համար պատրաստվել են 7,781 մգ/մլ վերջնական կոնցենտրացիայով (prim-O-գլյուկոզիլցիմիֆուգին), 31,125 մգ/մլ (4'-)O-β-D-գլյուկոզիլ-5-O-մեթիլվիսամինոլ), և 31,125 մգ/մլ (վրկ-Օ-գլյուկոզիլհամաուդոլ) մեթանոլում և պահվում է 4°C-ում:

2.3. Հակաբորբոքային գործունեության գնահատումIn Vitro

2.3.1. Բջջային կուլտուրա և նմուշների բուժում

RAW 264.7 բջիջները ստացվել են American Type Culture Collection-ից (ATCC, Manassas, VA, USA) և աճեցվել են DMEM միջավայրում, որը պարունակում է 1% հակաբիոտիկներ և 5.5% FBS: Բջիջները ինկուբացվել են 5% CO2 խոնավացված մթնոլորտում 37°C ջերմաստիճանում: Բջիջները խթանելու համար միջավայրը փոխարինվել է թարմ DMEM միջավայրով և լիպոպոլիսախարիդով (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, ԱՄՆ) 1 հասցեում:μգ/մլ ավելացվել է SDE-ի առկայության կամ բացակայության դեպքում (200 կամ 400μգ/մլ) լրացուցիչ 24 ժամ:

2.3.2. Ազոտի օքսիդի (NO), պրոստագլանդին E2 (PGE2), ուռուցքային նեկրոզային գործոնի որոշում-α(TNF-α), և Ինտերլեյկին-6 (IL-6) արտադրություն

Բջիջները մշակվել են SDE-ով և խթանվել LPS-ով 24 ժամ: NO-ի արտադրությունը վերլուծվել է նիտրիտների չափման միջոցով՝ օգտագործելով Griess ռեագենտը՝ համաձայն նախորդ ուսումնասիրության [12]։ Բորբոքային ցիտոկինների սեկրեցիա PGE2, TNF-α, և IL-6-ը որոշվել է ELISA հավաքածուի միջոցով (R&D համակարգեր)՝ ըստ արտադրողի հրահանգների: SDE-ի ազդեցությունը NO-ի և ցիտոկինի արտադրության վրա որոշվել է 540 նմ կամ 450 նմ՝ օգտագործելով Wallac EnVision:™microplate reader (PerkinElmer):

2.4. Antiosteoarthritis գործունեության գնահատումՎիվոյում

2.4.1. Կենդանիներ

Sprague-Dawley արու առնետները (7 շաբաթական) գնվել են Samtako Inc.-ից (Օսան, Կորեա) և տեղավորվել վերահսկվող պայմաններում՝ 12-ժամյա լույս/մութ ցիկլով:°C և% խոնավություն: Առնետներին տրամադրվել է լաբորատոր դիետա և ջուրազատորեն. Բոլոր փորձարարական պրոցեդուրաներն իրականացվել են Առողջապահության ազգային ինստիտուտի (NIH) ուղեցույցներին համապատասխան և հաստատվել են Դեջոն համալսարանի Կենդանիների խնամքի և օգտագործման կոմիտեի կողմից (Դեջոն, Կորեայի Հանրապետություն):

2.4.2. OA-ի ինդուկցիան ՄԻԱ-ով առնետների մոտ

Կենդանիները պատահականորեն բաժանվեցին և նշանակվեցին բուժման խմբերի մինչև հետազոտության մեկնարկը (յուրաքանչյուր խմբի համար): ՄԻԱ լուծույթ (3 մգ/50μL 0,9% ֆիզիոլոգիական լուծույթ) ուղղակիորեն ներարկվել է աջ ծնկի ներհոդային տարածություն՝ անզգայացման տակ, որն առաջացել է կետամինի և քսիլազինի խառնուրդով: Առնետները պատահականորեն բաժանվել են չորս խմբի՝ (1) աղի խումբ առանց MIA ներարկման, (2) MIA խումբ MIA ներարկումով, (3) SDE-ով բուժված խումբ (200 մգ/կգ) MIA ներարկումով և (4) ) ինդոմետասին- (IM-) բուժված խումբը (2 մգ/կգ) ՄԻԱ ներարկումով: Առնետներին բերանային տրվել է SDE և IM ներարկումից 1 շաբաթ առաջ 4 շաբաթ շարունակ: Այս ուսումնասիրության մեջ օգտագործված SDE-ի և IM-ի չափաբաժինը հիմնված է նախորդ ուսումնասիրություններում կիրառվածների վրա [10,13,14].

2.4.3. Հին թաթերի քաշի կրող բաշխման չափումներ

OA ինդուկցիայից հետո խախտվեց հետևի թաթերի քաշը կրելու կարողության սկզբնական հավասարակշռությունը: Անգործունակության փորձարկիչ (Linton instrumentation, Norfolk, UK) օգտագործվել է քաշի կրելու հանդուրժողականության փոփոխությունները գնահատելու համար: Առնետները խնամքով տեղադրվեցին չափման խցիկի մեջ: Հետևի վերջույթի կողմից գործադրվող քաշը կրող ուժը միջինացվել է 3 վրկ ժամանակահատվածում: Քաշի բաշխման հարաբերակցությունը հաշվարկվել է հետևյալ հավասարմամբ.15].

2.4.4. Շիճուկի ցիտոկինի մակարդակների չափումներ

Արյան նմուշները ցենտրիֆուգվել են 1500 գ-ում 10 րոպե 4°C-ում; այնուհետև շիճուկը հավաքվել և պահպանվել է -70°C ջերմաստիճանում մինչև օգտագործումը: IL-1-ի մակարդակներըβ, IL-6, TNF-αև PGE2-ը շիճուկում չափվել են R&D Systems-ի ELISA փաթեթների միջոցով (Միննեապոլիս, MN, ԱՄՆ)՝ ըստ արտադրողի ցուցումների:

2.4.5. Իրական ժամանակի քանակական RT-PCR վերլուծություն

Ընդհանուր ՌՆԹ-ն արդյունահանվել է ծնկի հոդի հյուսվածքից՝ օգտագործելով TRI ռեագենտ® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ԱՄՆ), հակադարձ տառադարձվել cDNA-ի և PCR-ով ուժեղացվել՝ օգտագործելով TM One Step RT PCR հավաքածու SYBR կանաչով (Applied Biosystems): , Գրանդ Այլենդ, Նյու Յորք, ԱՄՆ)։ Իրական ժամանակում քանակական PCR-ն իրականացվել է Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR համակարգի միջոցով (Applied Biosystems, Grand Island, NY, ԱՄՆ): Պրայմերների հաջորդականությունը և զոնդ-հաջորդականությունը ներկայացված են Աղյուսակում1. Նմուշի cDNA-ների և հավասար քանակությամբ GAPDH cDNA-ի մասնաբաժինները ուժեղացվել են TaqMan® Universal PCR հիմնական խառնուրդով, որը պարունակում է ԴՆԹ պոլիմերազ՝ համաձայն արտադրողի ցուցումների (Applied Biosystems, Foster, CA, ԱՄՆ): ՊՇՌ պայմանները 2 րոպե 50°C-ում, 10 րոպե 94°C-ում, 15 վրկ 95°C-ում և 1 րոպե 60°C-ում 40 ցիկլերի համար: Թիրախային գենի կոնցենտրացիան որոշվել է համեմատական ​​Ct (շեմային ցիկլի համարը ամպլիֆիկացման գծապատկերի և շեմի միջև խաչմերուկում) մեթոդով, ըստ արտադրողի հրահանգների:

FOB Գին:ԱՄՆ դոլար 0,5 - 9999 / հատ

Min.Order Քանակ:100 հատ/կտոր

Մատակարարման ունակություն.10000 հատ/կտոր ամսական