Մաքուր Saposhnikovia divaricata յուղ մոմերի և օճառի պատրաստման համար, մեծածախ դիֆուզորի եթերայուղ, նոր եղեգի այրիչի դիֆուզորների համար

կարճ նկարագրություն՝

 

2.1. SDE-ի պատրաստում

SD-ի կոճղարմատները չորացված խոտաբույսի տեսքով գնվել են Hanherb Co.-ից (Գուրի, Կորեա): Բուսական նյութերը տաքսոնոմիկորեն հաստատվել են Կորեայի արևելյան բժշկության ինստիտուտի (KIOM) դոկտոր Գո-Յա Չոյի կողմից: Վկայագրի նմուշը (համար 2014 SDE-6) տեղադրվել է Կորեայի ստանդարտ բուսական ռեսուրսների հերբարիումում: SD-ի չորացված կոճղարմատները (320 գ) երկու անգամ արդյունահանվել են 70% էթանոլով (2 ժամյա ռեֆլյուքսով), որից հետո քաղվածքը խտացվել է նվազեցված ճնշման տակ: Թթվային լուծույթը զտվել է, լիոֆիլացվել և պահվել 4°C ջերմաստիճանում: Չոր քաղվածքի ելքը հում ելանյութերից կազմել է 48.13% (ք/ք):

 

2.2. Քանակական բարձր արդյունավետության հեղուկ քրոմատոգրաֆիայի (HPLC) վերլուծություն

Քրոմատոգրաֆիկ վերլուծությունը կատարվել է HPLC համակարգով (Waters Co., Milford, MA, ԱՄՆ) և ֆոտոդիոդային զանգվածային դետեկտորով: SDE-ի HPLC վերլուծության համար օգտագործվել էO-գլյուկոզիլցիմիֆուգինի ստանդարտը գնվել է Կորեայի ավանդական բժշկության արդյունաբերության առաջխաղացման ինստիտուտից (Կյոնսան, Կորեա), ևվայրկյան-Օ-գլյուկոզիլհամաուդոլ և 4'-O-β-D-գլյուկոզիլ-5-OՄեթիլվիզամինոլը մեկուսացվել է մեր լաբորատորիայում և նույնականացվել սպեկտրալ վերլուծությունների միջոցով, հիմնականում՝ NMR և MS մեթոդներով։

SDE նմուշները (0.1 մգ) լուծվել են 70% էթանոլի մեջ (10 մլ): Քրոմատոգրաֆիկ բաժանումը կատարվել է XSelect HSS T3 C18 սյունակով (4.6 × 250 մմ, 5μմ, Waters Co., Միլֆորդ, Մասաչուսեթս, ԱՄՆ): Շարժական փուլը բաղկացած էր ացետոնիտրիլից (A) և 0.1% քացախաթթվից ջրի մեջ (B)՝ 1.0 մլ/րոպե հոսքի արագությամբ: Օգտագործվել է բազմաստիճան գրադիենտային ծրագիր հետևյալ կերպ՝ 5% A (0 րոպե), 5–20% A (0–10 րոպե), 20% A (10–23 րոպե) և 20–65% A (23–40 րոպե): Հայտնաբերման ալիքի երկարությունը սկանավորվել է 210–400 նմ-ում և գրանցվել 254 նմ-ում: Ներարկման ծավալը կազմել է 10.0μԼ. Երեք քրոմոնների որոշման համար ստանդարտ լուծույթներ պատրաստվել են 7.781 մգ/մլ վերջնական կոնցենտրացիայով (պրիմ-O-գլյուկոզիլցիմիֆուգին), 31.125 մգ/մլ (4′-O-β-D-գլյուկոզիլ-5-O-մեթիլվիզամինոլ), և 31.125 մգ/մլ (վայրկյան-Օ-գլյուկոզիլհամաուդոլ) մեթանոլում և պահել 4°C ջերմաստիճանում։

2.3. Հակաբորբոքային ակտիվության գնահատումԻն վիտրո

2.3.1. Բջջային կուլտուրա և նմուշի մշակում

RAW 264.7 բջիջները ստացվել են Ամերիկյան տիպի մշակույթների հավաքածուից (ATCC, Մանասաս, Վիրջինիա, ԱՄՆ) և աճեցվել են DMEM միջավայրում, որը պարունակում է 1% հակաբիոտիկներ և 5.5% FBS: Բջիջները ինկուբացվել են 5% CO2 խոնավացված մթնոլորտում՝ 37°C ջերմաստիճանում: Բջիջները խթանելու համար միջավայրը փոխարինվել է թարմ DMEM միջավայրով և լիպոպոլիսախարիդով (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., Սենթ Լուիս, Միսսուրի, ԱՄՆ)՝ 1°C ջերմաստիճանում:μգ/մլ-ը ավելացվել է SDE-ի առկայության կամ բացակայության դեպքում (200 կամ 400μգ/մլ) լրացուցիչ 24 ժամվա ընթացքում։

2.3.2. Ազոտի օքսիդի (NO), պրոստագլանդին E2-ի (PGE2), ուռուցքի նեկրոզի գործոնի որոշումα(TNF-α), և ինտերլեյկին-6-ի (IL-6) արտադրություն

Բջիջները մշակվել են SDE-ով և խթանվել LPS-ով 24 ժամ։ NO արտադրությունը վերլուծվել է նիտրիտի չափման միջոցով՝ օգտագործելով Գրիսի ռեակտիվը՝ համաձայն նախորդ ուսումնասիրության [12] Բորբոքային ցիտոկինների՝ PGE2-ի, TNF-ի սեկրեցիաα, իսկ IL-6-ը որոշվել է ELISA հավաքածուի միջոցով (R&D համակարգեր)՝ համաձայն արտադրողի հրահանգների: SDE-ի ազդեցությունը NO-ի և ցիտոկինների արտադրության վրա որոշվել է 540 նմ կամ 450 նմ-ում՝ օգտագործելով Wallac EnVision:™Միկրոթիթեղի կարդացող սարք (PerkinElmer):

2.4. Հակաօստեոարթրիտային ակտիվության գնահատումԻն Վիվո

2.4.1. Կենդանիներ

Սփրեյգ-Դոլի ցեղատեսակի արու առնետները (7 շաբաթական) ձեռք են բերվել Samtako Inc.-ից (Օսան, Կորեա) և պահվել են վերահսկվող պայմաններում՝ 12-ժամյա լույս/մութ ցիկլով։°C և% խոնավություն։ Առնետներին տրամադրվել է լաբորատոր սննդակարգ և ջուր։ad libitumԲոլոր փորձարարական ընթացակարգերը կատարվել են Առողջապահության ազգային ինստիտուտների (NIH) ուղեցույցներին համապատասխան և հաստատվել են Դեջոնի համալսարանի (Դեջոն, Կորեայի Հանրապետություն) կենդանիների խնամքի և օգտագործման կոմիտեի կողմից։

2.4.2. Առնետների մոտ օստեոարթրիտի ինդուկցիա՝ ՄԻԱ-ով

Կենդանիները պատահականորեն բաժանվել են և բաշխվել բուժման խմբերի՝ ուսումնասիրության մեկնարկից առաջ (մեկ խմբի համար): MIA լուծույթ (3 մգ/50μԿետամինի և քսիլազինի խառնուրդով առաջացրած անզգայացման ներքո աջ ծնկի ներհոդային տարածություն է ներարկվել 0.9% ֆիզիոլոգիական լուծույթի 1/4 լ: Առնետները պատահականորեն բաժանվել են չորս խմբի՝ (1) ֆիզիոլոգիական լուծույթով խումբ՝ առանց ՄԻԱ ներարկման, (2) ՄԻԱ խումբ՝ ՄԻԱ ներարկմամբ, (3) ՍԴԵ-ով բուժված խումբ (200 մգ/կգ)՝ ՄԻԱ ներարկմամբ և (4) ինդոմետացինով (ներմեջ-) բուժված խումբ (2 մգ/կգ)՝ ՄԻԱ ներարկմամբ: Առնետներին ՄԻԱ ներարկումից 1 շաբաթ առաջ՝ 4 շաբաթվա ընթացքում, բանավոր տրվել է ՍԴԵ և ՆԵՐՄ: Այս ուսումնասիրության մեջ օգտագործված ՍԴԵ-ի և ՆԵՐՄ դեղաչափը հիմնված է եղել նախորդ ուսումնասիրություններում օգտագործված դեղաչափերի վրա [10,13,14].

2.4.3. Հետևի թաթերի քաշի բաշխման չափումներ

ՕԱ-ի ինդուկցիայի արդյունքում հետևի թաթերի քաշը կրելու ունակության սկզբնական հավասարակշռությունը խախտվեց: Քաշը կրելու հանդուրժողականության փոփոխությունները գնահատելու համար օգտագործվել է անաշխատունակության չափիչ սարք (Linton instrumentation, Նորֆոլկ, Մեծ Բրիտանիա): Առնետները զգուշորեն տեղադրվել են չափման խցիկ: Հետևի վերջույթի կողմից գործադրվող քաշը կրելու ուժը միջինացվել է 3 վայրկյան ժամանակահատվածում: Քաշի բաշխման հարաբերակցությունը հաշվարկվել է հետևյալ հավասարմամբ՝ [քաշը աջ հետևի վերջույթի վրա/(քաշը աջ հետևի վերջույթի վրա + քաշը ձախ հետևի վերջույթի վրա)] × 100 [15].

2.4.4. Արյան շիճուկի ցիտոկինների մակարդակի չափումներ

Արյան նմուշները ցենտրիֆուգացվել են 1500 գ-ի տակ 10 րոպե 4°C ջերմաստիճանում, այնուհետև շիճուկը հավաքվել և պահվել է -70°C ջերմաստիճանում մինչև օգտագործումը։ IL-1-ի մակարդակներըβ, IL-6, TNF-α, և շիճուկում PGE2-ը չափվել են R&D Systems-ի (Մինեապոլիս, Մինեսոտա, ԱՄՆ) ELISA հավաքածուների միջոցով՝ համաձայն արտադրողի հրահանգների։

2.4.5. Իրական ժամանակի քանակական RT-PCR վերլուծություն

Ընդհանուր ՌՆԹ-ն արդյունահանվել է ծնկի հոդի հյուսվածքից՝ օգտագործելով TRI ռեագենտ®-ը (Sigma-Aldrich, Սենթ Լուիս, Միսսուրի, ԱՄՆ), հակադարձ տրանսկրիպցիայի ենթարկվել է կԴՆԹ-ի և ՊՇՌ-ամպլիֆիկացվել է՝ օգտագործելով SYBR կանաչով TM One Step RT ՊՇՌ հավաքածուն (Applied Biosystems, Գրանդ Այլենդ, Նյու Յորք, ԱՄՆ): Իրական ժամանակի քանակական ՊՇՌ-ն իրականացվել է Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR համակարգի միջոցով (Applied Biosystems, Գրանդ Այլենդ, Նյու Յորք, ԱՄՆ): Պրայմերների հաջորդականությունները և զոնդի հաջորդականությունը ներկայացված են աղյուսակում:1Նմուշային կԴՆԹ-ների ալիքվոտները և GAPDH կԴՆԹ-ի հավասար քանակությունը ամպլիֆիկացվել են TaqMan® Universal PCR գլխավոր խառնուրդով, որը պարունակում է ԴՆԹ պոլիմերազ՝ համաձայն արտադրողի հրահանգների (Applied Biosystems, Foster, CA, USA): ՊՇՌ պայմանները տևել են 2 րոպե 50°C-ում, 10 րոպե 94°C-ում, 15 վայրկյան 95°C-ում և 1 րոպե 60°C-ում՝ 40 ցիկլի համար: Թիրախային գենի կոնցենտրացիան որոշվել է համեմատական ​​Ct մեթոդով (ամպլիֆիկացիայի գրաֆիկի և շեմի միջև խաչմերուկում շեմային ցիկլի համար)՝ համաձայն արտադրողի հրահանգների:

FOB գինը՝ԱՄՆ դոլար 0.5 - 9,999 / հատ

Նվազագույն պատվերի քանակը՝100 հատ/հատ

Մատակարարման կարողություն:10000 հատ/հատ մեկ ամսվա համար