Օստեոարթրիտը (ՕԱ) ոսկրային-հոդային երկարատև քրոնիկ դեգեներատիվ հիվանդություններից մեկն է, որը ազդում է 65 տարեկանից բարձր բնակչության վրա [1]:
1]: Սովորաբար, օստեոարթրիտի դեպքում ախտորոշվում են վնասված աճառներ, բորբոքված սինովիալ մեմբրաններ և էրոզիայի ենթարկված խոնդրոցիտներ, որոնք առաջացնում են ցավ և ֆիզիկական տառապանք [:
2] Արտրիտային ցավը հիմնականում առաջանում է հոդերի աճառի դեգեներացիայից՝ բորբոքման պատճառով, և երբ աճառը լուրջ վնասվում է, ոսկորները կարող են բախվել միմյանց՝ առաջացնելով անտանելի ցավ և ֆիզիկական դժվարություններ [
3] Բորբոքային միջնորդների ներգրավվածությունը այնպիսի ախտանիշների հետ, ինչպիսիք են ցավը, այտուցը և հոդի կոշտությունը, լավ փաստաթղթավորված է: OA հիվանդների մոտ սինովիալ հեղուկում հայտնաբերվում են բորբոքային ցիտոկիններ, որոնք առաջացնում են աճառի և ենթաքոնդրալ ոսկրի էրոզիա [
4]: Օստեոարթրիտի հիվանդների երկու հիմնական գանգատներն են ցավը և սինովիալ բորբոքումը: Հետևաբար, Օստեոարթրիտի ներկայիս թերապիաների հիմնական նպատակներն են ցավի և բորբոքման նվազեցումը: [
5] Չնայած օստեոարթրիտի բուժման մատչելի մեթոդները, ներառյալ ոչ ստերոիդային և ստերոիդային դեղամիջոցները, ապացուցել են իրենց արդյունավետությունը ցավի և բորբոքման մեղմացման գործում, այս դեղամիջոցների երկարատև օգտագործումը լուրջ առողջական հետևանքներ ունի, ինչպիսիք են սրտանոթային, ստամոքս-աղիքային և երիկամային դիսֆունկցիաները [
6] Այսպիսով, օստեոարթրիտի բուժման համար անհրաժեշտ է մշակել ավելի արդյունավետ դեղամիջոց՝ ավելի քիչ կողմնակի ազդեցություններով։
Բնական առողջապահական արտադրանքը գնալով ավելի մեծ ժողովրդականություն է վայելում իրենց անվտանգ և հեշտությամբ մատչելի լինելու շնորհիվ [
7Կորեական ավանդական դեղամիջոցները ապացուցել են իրենց արդյունավետությունը մի շարք բորբոքային հիվանդությունների, այդ թվում՝ արթրիտի դեմ [
8]: Aucklandia lappa DC.-ն հայտնի է իր բուժիչ հատկություններով, ինչպիսիք են ցիի շրջանառության բարելավումը՝ ցավը մեղմելու և ստամոքսը հանգստացնելու համար, և ավանդաբար օգտագործվել է որպես բնական ցավազրկող [
9] Նախորդ հաղորդագրությունները ենթադրում են, որ A. lappa-ն ունի հակաբորբոքային [
10,
11], ցավազրկող [
12], հակաքաղցկեղային [
13], և ստամոքսապաշտպանիչ [
14] ազդեցություններ։ A. lappa-ի տարբեր կենսաբանական ակտիվությունները պայմանավորված են դրա հիմնական ակտիվ միացություններով՝ կոսթունոլիդ, դեհիդրոկոստուս լակտոն, դիհիդրոկոստունոլիդ, կոսթուսլակտոն, α-կոստոլ, սալսուրեա լակտոն և կոսթուսլակտոն [
15]: Նախկինում կատարված ուսումնասիրությունները պնդում են, որ կոսթունոլիդը հակաբորբոքային հատկություններ է ցուցաբերել լիպոպոլիսախարիդում (LPS), որը մակրոֆագերը ինդուկցրել է NF-kB-ի և ջերմային շոկի սպիտակուցային ուղու կարգավորման միջոցով [
16,
17] Այնուամենայնիվ, ոչ մի ուսումնասիրություն չի ուսումնասիրել A. lappa-ի պոտենցիալ ակտիվությունը օստեոարթրիտի բուժման համար: Ներկայիս հետազոտությունը ուսումնասիրել է A. lappa-ի թերապևտիկ ազդեցությունները օստեոարթրիտի դեմ՝ օգտագործելով (մոնոնատրիումի-յոդոացետատ) MIA և քացախաթթվով ինդուկցված կրծողների մոդելներ:
Մոնոսոդիումի յոդոացետատը (ՄՅԱ) հայտնի է որպես կենդանիների մոտ ցավային վարքագծերի մեծ մասի և օստեոարթրիտի պաթոֆիզիոլոգիական առանձնահատկությունների առաջացման պատճառ [
18,
19,
20] Երբ ներարկվում է ծնկի հոդերի մեջ, MIA-ն խաթարում է խոնդրոցիտների նյութափոխանակությունը և առաջացնում բորբոքում և բորբոքային ախտանիշներ, ինչպիսիք են աճառի և ենթախոնդրալ ոսկրի էրոզիան, որոնք օստեոարթրիտի հիմնական ախտանիշներն են [
18] Քացախաթթվով առաջացած գալարվող ռեակցիան լայնորեն համարվում է կենդանիների մոտ ծայրամասային ցավի սիմուլյացիա, որտեղ բորբոքային ցավը կարող է քանակապես չափվել [
19] Մկան մակրոֆագերի բջջային գիծը՝ RAW264.7-ը, լայնորեն օգտագործվում է բորբոքման նկատմամբ բջջային արձագանքները ուսումնասիրելու համար: LPS-ով ակտիվանալուց հետո RAW264 մակրոֆագերը ակտիվացնում են բորբոքային ուղիները և արտազատում են մի քանի բորբոքային միջնորդներ, ինչպիսիք են՝ TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS և IL-6 [
20] Այս ուսումնասիրությունը գնահատել է A. lappa-ի հակա-նոցիցեպտիվ և հակաբորբոքային ազդեցությունները OA-ի դեմ MIA կենդանական մոդելում, քացախաթթվով ինդուկցված կենդանական մոդելում և LPS-ակտիվացված RAW264.7 բջիջներում:
2. Նյութեր և մեթոդներ
2.1. Բուսական նյութ
Փորձի մեջ օգտագործված A. lappa DC.-ի չորացրած արմատը ձեռք է բերվել Epulip Pharmaceutical Co., Ltd.-ից (Սեուլ, Կորեա): Այն նույնականացվել է Գաչոնի համալսարանի կորեական բժշկության գնդապետ, բուսական դեղագիտության ամբիոնի պրոֆեսոր Դոնգհուն Լիի կողմից, իսկ վաուչերի նմուշի համարը գրանցվել է որպես 18060301:
2.2. A. lappa քաղվածքի HPLC վերլուծություն
A. lappa-ն արդյունահանվել է ռեֆլյուքսային սարքի միջոցով (թորած ջուր, 3 ժամ 100°C ջերմաստիճանում): Արդյունահանված լուծույթը զտվել և խտացվել է ցածր ճնշման գոլորշիչի միջոցով: A. lappa-ի արդյունահանումը -80°C ջերմաստիճանում սառեցմամբ չորացնելուց հետո ունեցել է 44.69% ելք: A. lappa-ի քրոմատոգրաֆիկ վերլուծությունը կատարվել է HPLC-ով, որը միացված է 1260 InfinityⅡ HPLC համակարգին (Agilent, Pal Alto, CA, ԱՄՆ): Քրոմատիկ բաժանման համար օգտագործվել է EclipseXDB C18 սյունը (4.6 × 250 մմ, 5 µm, Agilent) 35°C ջերմաստիճանում: Նմուշի ընդհանուր 100 մգ նոսրացվել է 10 մլ 50% մեթանոլի մեջ և ենթարկվել է ուլտրաձայնային մշակման 10 րոպե: Նմուշները զտվել են 0.45 մկմ ներարկիչ ֆիլտրով (Waters Corp., Milford, MA, ԱՄՆ): Շարժական փուլի կազմը կազմել է 0.1% ֆոսֆորական թթու (A) և ացետոնիտրիլ (B), և սյունը էլուացվել է հետևյալ կերպ՝ 0–60 րոպե, 0%; 60–65 րոպե, 100%; 65–67 րոպե, 100%; 67–72 րոպե, 0% լուծիչ B՝ 1.0 մլ/րոպե հոսքի արագությամբ: Արտահոսքը դիտարկվել է 210 նմ-ում՝ օգտագործելով 10 մկլ ներարկման ծավալ: Վերլուծությունը կատարվել է եռակի:
2.3. Կենդանիների կացարան և կառավարում
Սփրեգ-Դոլի (SD) 5 շաբաթական արու առնետները և ICR 6 շաբաթական արու մկները ձեռք են բերվել Samtako Bio Korea-ից (Կյոնգի-դո, Կորեա): Կենդանիները պահվել են սենյակում՝ օգտագործելով հաստատուն ջերմաստիճան (22 ± 2 °C) և խոնավություն (55 ± 10%), ինչպես նաև լույս/մութ 12/12 ժամ տևողությամբ ցիկլ: Կենդանիները ծանոթացել են պայմաններին փորձի սկսվելուց մեկ շաբաթից ավելի առաջ: Կենդանիներին տրամադրվել է կերի և ջրի ad libitum մատակարարում: Կենդանիների վրա կատարված բոլոր փորձարարական ընթացակարգերում խստորեն պահպանվել են Գաչոնի համալսարանում կենդանիների խնամքի և վարվելու գործող էթիկական կանոնները (GIACUC-R2019003): Ուսումնասիրությունը նախագծվել է հետազոտողի կողմից կույր և զուգահեռ փորձարկմամբ: Մենք հետևել ենք էվթանազիայի մեթոդին՝ համաձայն Կենդանիների փորձարարական էթիկայի կոմիտեի ուղեցույցների:
2.4. MIA ներարկում և բուժում
Առնետները պատահականորեն բաժանվել են 4 խմբի՝ կեղծ, վերահսկիչ, ինդոմետացին և A. lappa: 2% իզոֆլուորան O2 խառնուրդով անզգայացված առնետներին ներարկվել է 50 մկլ MIA (40 մգ/մ²; Sigma-Aldrich, Սենթ Լուիս, Միսսուրի, ԱՄՆ) ներհոդային ներարկում՝ փորձարարական օստեոարթրիտի առաջացման համար: Բուժումներն իրականացվել են հետևյալ կերպ. վերահսկիչ և կեղծ խմբերը պահպանվել են միայն AIN-93G հիմնական սննդակարգով: Միայն ինդոմետացինի խմբին է տրամադրվել ինդոմետացին (3 մգ/կգ), որը ներառված է AIN-93G սննդակարգի մեջ, իսկ A. lappa 300 մգ/կգ խմբին տրվել է AIN-93G սննդակարգ՝ լրացված A. lappa-ով (300 մգ/կգ): Բուժումները շարունակվել են օստեոարթրիտի ինդուկցիայի օրվանից 24 օր՝ օրական 190-210 գ մարմնի քաշի համար 15-17 գ չափաբաժնով:
2.5. Քաշի կրող չափում
ՕՏ-ի ինդուկցիայից հետո, ըստ ժամանակացույցի, առնետների հետևի վերջույթների քաշը կրելու կարողության չափումը կատարվել է incapacitance-MeterTester600 (IITC Life Science, Woodland Hills, CA, USA) սարքի միջոցով: Հաշվարկվել է քաշի բաշխումը հետևի վերջույթների վրա՝ քաշը կրելու կարողություն (%):
